Інформація призначена тільки для фахівців сфери охорони здоров'я, осіб,
які мають вищу або середню спеціальну медичну освіту.

Підтвердіть, що Ви є фахівцем у сфері охорони здоров'я.

"Child`s Health" 2 (23) 2010

Back to issue

Экспериментальное изучение влияния препарата Септолете плюс на факторы противовирусного иммунитета in vitro

Authors: Мельников О.Ф., Тимченко М.Д., Кривохатская Л.Д., Мурзина Э.А., ГУ «Институт отоларингологии им. проф. А.И. Коломийченко АМН Украины», г. Киев

Categories: Pediatrics/Neonatology

print version


Summary

В условиях эксперимента in vitro изучено влияние препарата Септолете плюс на выработку a- и g-интерферонов клетками небных миндалин и мононуклеаров периферической крови больных хроническим тонзиллитом в присутствии индуктора интерферона и без него, а также на цитолитическую активность в отношении ксеногенных эритроцитов. Установлено, что препарат Септолете плюс активировал продукцию раннего интерферона и выступал в роли кофактора при использовании индуктора интерфероногенеза — ридостина. Препарат умеренно стимулировал цитолитическую активность естественных цитотоксических клеток миндалин и периферической крови.


Keywords

Септолете плюс, интерферон, противовирусный иммунитет.

Введение

Сегодня в связи с повышением уровня заболеваний, обусловленных вирусами, и особенно гриппа, наблюдается увеличение числа исследований, направленных на изучение антивирусных свойств фармацевтических препаратов, которые используются как противовоспалительные средства [2, 6]. Одним из эффективных препаратов с антисептическим характером действия, которые широко используются в отоларингологии, является препарат местного применения Септолете плюс, состоящий из цетилпиридиния хлорида (антисептический компонент) и анестетика (бензокаин). Ранее было показано, что Септолете плюс не обладает депрессорным действием на состояние местного иммунитета, основанного на определении иммуноглобулинов, лактоферрина и цитокинов в ротоглоточном секрете больных острым фарингитом [8]. Известно, что одним из основных антивирусных механизмов является продукция ранних интерферонов — a - и b - и более позднего g -интерферона [5]. Эти интерфероны на первых этапах вирусного заражения могут блокировать вирусную информационную РНК в инфицированной клетке и препятствовать репродукции вирусов. Далее интерфероны способны активировать естественные цитотоксические клетки (ЕЦК) и цитотоксические Т-лимфоциты [4]. По мнению авторов, механизм антивирусной защиты состоит из таких последовательных механизмов:
— внутриклеточная ингибиция ранними интерферонами репродукции вирусов;
— удаление с помощью ЕЦК и Т-лимфоцитов инфицированных клеток;
— приобретение здоровыми клетками, которые находятся возле очага заражения, резистентности к инфицированию за счет ранних интерферонов;
— привлечение в очаг заражения макрофагов и лейкоцитов и активация их функциональной активности.

Цель работы — исследовать in vitro антивирусные свойства препарата Септолете плюс, его способность усиливать продукцию интерферонов и деструктивные свойства тканевых и кровяных естественных цитотоксических клеток.

Материал и методы исследования

Исследования in vitro проведены на клетках небных миндалин и периферической крови 12 больных хроническим тонзиллитом в возрасте 7–19 лет. Этим больным по показаниям проведена тонзиллэктомия. Клеточный материал получен из ткани миндалин и крови в соответствии с рекомендациями О.Ф. Мельникова и И.П. Кайдашева [7, 10]. Культивирование клеток проводили в питательной среде RPMI-1640 с добавками (L-глютамин, эмбриональная телячья сыворотка 5%, гентамицин 40 мкг/мл) в течение 18 часов для определения уровня цитолиза и в течение 24 часов — для определения интерферонопродукции с различными концентрациями препарата: 1 и 2. Контролем служили образцы культивируемых клеток крови и миндалин без препарата, в которых определяли исходный уровень активности и через 24 часа культивирования. Разведение препарата Септолете плюс 1 соответствовало добавлению к клеткам 0,1 мл водно-солевого экстракта, содержащего 1 измельченную таблетку препарата в 5 мл раствора Хэнкса и стерилизованного пропусканием через фильтр типа Millipore. Разведение 2 соответствовало 0,01 мл исходной концентрации. После 18-часового культивирования в опытных и контрольных образцах определяли цитолитическую активность клеток в отношении эритроцитов цыплят по спектрофотометрическому методу (анализатор Stat Fax 2100, США), описанному О.Ф. Мельниковым и Т.А. Заяц [11]. В надосадочной жидкости после суточного культивирования клеток определяли содержание a - и g -интерферонов иммуноферментным методом с помощью набора реактивов ООО «Протеиновый контур» (С п б., РФ) и иммуноферментного анализатора Stat Fax 2100 (США). Кроме того, для проверки предположения о возможной потенцирующей интерфероно­образование способности препарата в отдельные пробы с указанными концентрациями препарата добавляли индуктор интерфероногенеза — ридостин по 0,1 мл. Все пробы выполнялись в дублирующем исполнении. Материалы статистически обработаны с применением метода углового преобразования ( j ) по Фишеру [1].

Результаты исследований и их обсуждение

В ходе исследования установлено, что препарат Септолете плюс достоверно усиливал образование ранних ( a ) интерферонов в культуре как клеток миндалин, так и клеток крови и обладал потенцирующим действием при добавлении ридостина (табл. 1). На продукцию позднего, иммунного интерферона ( g ) как клетками небных миндалин, так и клетками крови препарат влияния не оказывал (рис. 1). Это обстоятельство определяет исключительную целесообразность применения Септолете плюс на ранних этапах инфекционного вирусного процесса, т.к. во время рассасывания в ротовой полости препарат контактирует с поверхностью небных миндалин или диффузными лимфоидными фолликулами и может активировать в них продукцию a -интерферона.

Что касается влияния препарата на цитолитическую активность клеток крови и небных миндалин, то достоверного усиления этой активности выявлено не было (табл. 2), хотя вектор отклонений при добавлении различных концентраций препарата был одинаковым в сторону усиления деструктивной способности клеток (30–89 % от исходной величины) при использовании Септолете плюс в 9 из 12 наблюдений.

Известно, что активация функции ЕЦК связана с влиянием системы интерферона и других цитокинов [13] и до известной степени определяет противовирусный потенциал препарата [3, 4, 9]. Исходя из того, что препарат способен активировать синтез ранних интерферонов, играющих важную роль на начальных этапах инфекционного процесса [12], можно считать целесообразным применение препарата Септолете плюс на начальных стадиях вирусной инфекции.

Выводы

1. Раствор препарата Септолете плюс в условиях культивирования с клетками небных миндалин или периферической крови активирует синтез a -интерферона.

2. Препарат Септолете плюс способен усиливать действие индуктора g -интерферона — ридостина в условиях in vitro .

3. Не выявлено существенных изменений в продукции позднего интерферона ( g ) в культуре клеток крови и миндалин под действием препарата Септолете плюс.

4. Препарат Септолете плюс не угнетал активности естественных цитотоксических клеток крови и миндалин in vitro и имел вектор изменений в сторону стимуляции деструктивной активности мононуклеаров.

5. Препарат Септолете плюс может применяться при массовых вирусных заболеваниях верхних дыхательных путей.


Bibliography

1. Гублер Е. В. Математические методы анализа и распознавания патологических процессов — Л.: Медицина, 1978. — 294 с.
2. Еропкин М.Ю., Коновалов Н.И., Григорьева В.А. и др. Действие препарата Инфлюцид in vitro против пандемического штамма 2009 г. А (Н1N1) «свиного» («мексиканского») гриппа // Традиционная медицина. — 2009. — № 3(18). — С. 8-12.
3. Дранник Г.Н. Клиническая иммунология и аллергология. — К.: Полиграф-Плюс, 2006. — 481 с.
4. Ершов Ф.И., Норовлянский А.Н., Мезенцева М.В. Ранние цитокиновые реакции при вирусных инфекциях // Цитокины и воспаление. — 2004. — Т. 3, № 1. — С. 3-6.
5. Ершов Ф.И. Система интерферонов в норме и патологии. — М.: Медицина, 1996. — 240 с.
6. Мельников О.Ф., Тимченко С.В., Фараон И.В., Бре­дун А.Ю. Исследование противовоспалительных свойств тонзилотрена в эксперименте // Журн. вушн., нос. і горлових хвороб. — 2008. — № 6. — С. 37-40.
7. Кайдашев І.П. Методи клінічних та експериментальних досліджень у медицині. — Полтава: Полимет, 2003. — 319 с.
8. Заболотный Д.И., Пшеничкина В.Д., Вольская О.Г., Мельников О.Ф. Клинико-иммунологическая характеристика больных хроническим фарингитом в стадии обострения при лечении препаратом Септолете плюс // Журн. вушн., нос. і горлових хвороб. — 2007. — № 6. — С. 2-8.
9. Кривицкая В.З., Сомнина А.А., Сухолвецкая В.Ф. Иммунопатологический аллергический Th-2 тип противовирусного гуморального иммунитета у детей с респираторно-синцитиальной вирусной инфекцией // Цитокины и воспаление. — 2004. — Т. 3, № 3. — С. 34-37.
10. Мельников О.Ф. Иммунологические аспекты генеза хронического тонзиллита и регуляции функциональной активности небных миндалин: Дис… д-ра мед. наук: 14.00.16 / Институт физиологии АН УССР. — К., 1981. — 294 с.
11. Мельников О.Ф., Заяц Т.А. Сравнительная оценка радиоизотопного и спектрофотометрического методов регистрации цитолиза // Лаб. диагностика. — 1999. — № 2. — С. 32-34.
12. Никулин Б.А. Оценка и коррекция иммунного статуса. — М.: ГЭОТАР, 2008. — 375 с.
13. Симбирцев А.С. Цитокины: классификация и биологические функции // Цитокины и воспаление. — 2004. — Т. 3, № 2. — С. 16-22.
 

Similar articles

Experimental Studies on the Effects of the Drug Septolete on Oral Cavity Immunity Factors
Authors: Melnikov O.F., Prylutska A.D., Tymchenko M.D. - State Institution «Institute of Otolaryngology named after prof. A.I. Kolomyichenko» of the National Academy of Medical Sciences of Ukraine, Kyiv, Ukraine
"Child`s Health" 2 (70) 2016
Date: 2016.05.18
Categories: Pediatrics/Neonatology
Sections: Specialist manual

Back to issue